2025-03-17 07:08:25
基因藥物常用的AAV載體有三種生產(chǎn)方法,分別是三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系、桿狀病毒表達(dá)載體體系和包裝細(xì)胞體系。其中,20多年前開發(fā)的三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)表達(dá)技術(shù)仍然占據(jù)腺相關(guān)病毒AAV生產(chǎn)的主流地位,其三質(zhì)粒分別是Helper質(zhì)粒(含E2a/b、E4和VARNA基因)、目標(biāo)基因表達(dá)質(zhì)粒及輔助質(zhì)粒(含Cap和Rep基因)。雖然AAV病毒載體的血清型不同,但AAV的生產(chǎn)流程基本一致,主要有質(zhì)粒共轉(zhuǎn)宿主細(xì)胞HEK293、293細(xì)胞生產(chǎn)病毒顆粒、從細(xì)胞培養(yǎng)上清或/及細(xì)胞裂解液中收獲病毒載體、純化/制劑/無菌過濾/灌裝等流程。上海中鹽核酸酶產(chǎn)品質(zhì)量哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。上海上海倍篤生物中鹽核酸酶70950
慢病毒大規(guī)模純化的捕獲步驟包括:膜過濾澄清,隨后切向流過濾/超濾或者體積排阻色譜濃縮。此外,需用核酸酶(benzonase或M-SAN HQ中鹽核酸酶)來去除細(xì)胞殘留的、質(zhì)粒來源的DNA污染。這兩個(gè)步驟順序可以調(diào)整,依據(jù)項(xiàng)目工藝而定。兩種工藝路線各有優(yōu)缺點(diǎn):先用核酸酶消化的優(yōu)點(diǎn)是可去除大的DNA片段,且后續(xù)步驟可以去除殘留核酸酶;但所用的核酸酶的量也非常大。與此相反,將核酸酶步驟后置的優(yōu)點(diǎn)是大幅降低核酸酶的量(成本降低);但后面的步驟必須有將核酸酶去除的能力。此外,后期用核酸酶的缺點(diǎn)是核酸污染可能會(huì)結(jié)合慢病毒顆粒形成沉淀,進(jìn)而導(dǎo)致慢病毒在純化中流失,從而影響得率。上海生理鹽條件中鹽核酸酶70950-150生理鹽濃度下,M-SAN HQ中鹽核酸酶性能優(yōu)于常用核酸酶,對HCD的去除有些本質(zhì)區(qū)別。
宿主細(xì)胞DNA殘留的擔(dān)憂是基于致ai風(fēng)險(xiǎn)理論,特別是生產(chǎn)細(xì)胞系所包含的致ai序列,比如較常見腺病毒基因E1A和E1B(HEK293, PerC.6 和CAP 細(xì)胞系),人乳tou瘤病毒E6和E7基因(HeLa細(xì)胞系)等。當(dāng)使用致ai細(xì)胞系生產(chǎn)AAV時(shí),下游純化須盡可能減少殘留DNA。工業(yè)上一般使用核酸酶分解殘留DNA,普遍認(rèn)為小于200 bp的DNA片段可有效降低致ai風(fēng)險(xiǎn)。宿主細(xì)胞蛋白殘留與免疫原性、炎癥或過敏性休克有關(guān)。盡管與非人類的生產(chǎn)原料相比(非人類細(xì)胞系如BHK21或昆蟲細(xì)胞,以及輔助病毒如HSV、腺病毒、桿狀病毒),人類細(xì)胞免疫原性比較弱。
市售的M-SAN HQ中鹽核酸酶有三個(gè)規(guī)格,分別是25kU、500kU及5MU,分別滿足研發(fā)初期及大規(guī)模生產(chǎn)各階段的要求。通過SDS-PAGE檢測蛋白純度在99%以上。基于ArcticZymes Technologies的30年的酶學(xué)開發(fā)及大規(guī)模生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn),M-SAN HQ的生產(chǎn)體系穩(wěn)定,產(chǎn)品純度高,批次一致性好,無蛋白酶活性。廠家開發(fā)出特異的緩沖液體系,使M-SAN HQ保存起來更加穩(wěn)定,-15℃ - -30℃條件下保存4年沒有活性下降。研究數(shù)據(jù)表明,經(jīng)過5-6次的反復(fù)凍融,M-SAN HQ中鹽核酸酶活性沒有明顯變化。上海中鹽核酸酶價(jià)格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
ArcticZymes Technologies致力于提供高質(zhì)量產(chǎn)品,具有良好的批間一致性、穩(wěn)定可靠的質(zhì)量、及時(shí)的文件及技術(shù)支持。ArcticZymes所有產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)及銷售等都符合ISO13485:2016質(zhì)量管理體系標(biāo)準(zhǔn);鑒于生物制品更嚴(yán)格的質(zhì)控要求,廠家對鹽活性核酸酶系列產(chǎn)品(Salt Active Nucleases,SANs)的生產(chǎn)及質(zhì)控,在符合ISO13485:2016體系基礎(chǔ)上,增加了cGMP相應(yīng)要求,如生產(chǎn)用原輔料是Non-animal和Non-plant來源的,終產(chǎn)品經(jīng)過0.22?m過濾sterilization,放行檢測包括microbes、fungus及內(nèi)毒檢測等,所有標(biāo)準(zhǔn)符合USP-EP要求。衢州中鹽核酸酶價(jià)格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。上海上海倍篤生物中鹽核酸酶70950
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細(xì)胞基因藥物領(lǐng)域的進(jìn)展使得對高質(zhì)量基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的需求急劇增加,包括高質(zhì)量慢病毒載體(LV)的大規(guī)模生產(chǎn)。宿主細(xì)胞DNA殘留(HCD)是一類主要的工藝相關(guān)雜質(zhì),對下游純化帶來很大挑戰(zhàn)。根據(jù)相關(guān)法規(guī)要求,需要去除HCD才能達(dá)到臨床級LV。HCD去除是通過核酸酶處理聯(lián)合下游工藝(DSP)共同實(shí)現(xiàn)的。文章作者研究了兩款核酸酶M-SAN HQ中鹽核酸酶(ArcticZymes Technologies)和Benzonase(Merck)對HCD去除效率的差別,其下游工藝包含過濾澄清及TFF超濾。上海上海倍篤生物中鹽核酸酶70950